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  • TAURINA: Um novo marcador tumoral para detecção aprimorada de câncer de mama entre pacientes do sexo feminino

    O antioxidante Taurina demonstrou efeito aneoplásico através da regulação negativa da angiogênese e do aumento da apoptose de células tumorais. Verificou-se que uma inibição positiva da apoptose e a indução da angiogénese podem contribuir para o tumor do cancer da mama. 

    Objetivo do estudo para correlacionar o nível de taurina com os níveis de algumas biomoléculas operando tanto na angiogênese (VEGF, CD31) e apotptose (TNF -x e Caspas – 3) as quais poderiam ajudar na pronosticação do câncer de mama e evoluir para um possível papel do nível da taurina sérica  como um marcador precoce para câncer de mama em pacientes egípcios. 

    Pacientes e métodos: Quatro grupos de 85 candidatos do sexo feminino foram estudados neste trabalho. O primeiro grupo consiste de 50 pacientes do sexo feminino no Instituto Nacional do Câncer (NCI), Universidade do Cairo, foram diagnosticados e submetidos à cirurgia para o carcinoma de mama. No segundo grupo, 10 com lesões mamárias benignas foram incluídas. O terceiro grupo é composto por cinco casos, com história familiar positiva. Vinte mulheres saudáveis ​​também foram recrutadas como controle. Uma amostra de sangue pré-operatória foi retirada de cada paciente para medir o nível sérico de VEGF; Taurina; CA15.3 e TNF-x. Amostras de tumor fresco e suas correspondentes margens de segurança foram obtidas do primeiro e segundo grupos, para determinação da caspase-3; exame histopatológico e ensaio imuno-histoquímico de VEGF e CD31. 

    Resultado:  
    Não houve diferenças significativas no nível sérico de CA15.3 entre os pacientes com câncer de mama, o alto risco e o controle do grupo. Além disso, a relação correlativa entre o biomarcador angiogênico / apoptótico (VEGF / TNF-x) mostrou uma diferença altamente significativa entre os três grupos principais anteriores. 

    A mesma observação também foi observada na correlação entre a razão angiogênica / antiangiogênica (VEGF / taurina) nos mesmos grupos. Além disso, as atividades enzimáticas do Casp-3 no tecido homogeneizado foram estatisticamente maiores nos tecidos normais adjacentes do que nos tecidos malignos. 

    O resultado da investigação imuno-histoquímica mostrou um aumento significativo na densidade do VEGF intracelular e densidade microvascular expressa como CD31 em casos de câncer em comparação com o tecido adjacente normal. 

    Conclusão: Sugere-se que a avaliação do nível de taurina em soros de pacientes com alto risco para câncer de mama é de grande valor no diagnóstico precoce de alterações malignas na mama. 

    INTRODUÇÃO 

    O carcinoma de mama é o câncer mais prevalente entre as mulheres egípcias, constitui 29% dos casos do Cairo National Cancer Institute e geralmente é diagnosticado em estágio avançado (1,2). Existem várias hipóteses relacionadas à etiologia do câncer de mama, incluindo carcinogênese por hormônios esteróides, carcinógenos químicos e estresse oxidativo. 

    Estudos epidemiológicos sugerem que uma dieta rica em antioxidantes pode ajudar a prevenir o desenvolvimento do carcinoma de mama (3,4). O risco de vida para as mulheres dignosticadas com cancer de mama é atualmente 1 em 7 e 1 em 8, o risco é ainda maior para as mulheres com certos fatores de risco, como uma forte história familiar ou conhecido BCRA1 ou BCRA2 mutações (5). 

    Estudos experimentais sugerem que a atividade angiogênica do tumor pode resultar da regulação negativa de inibidores da angiogênese ou aumento da expressão de fatores de crescimento endotelial (6,7). Várias pesquisas enfatizaram que o VEGF é agora acreditado para ser um mediador chave da angiogênese em numerosos tumores sólidos, incluindo câncer de mama (7). Também foi descoberto que os níveis séricos de VEGF estavam significativamente elevados nos pacientes com câncer de mama em comparação com os dos controles e era mais sensível que o CA15.3 como marcador (8). 

    No câncer de mama, o estudo imunohistoquímico do sinal de VEGF em vasos sanguíneos pré-tumorais se correlacionou com a densidade de microvasos CD31 e D2-40 microvessel citométrico de imagem, com o papel do VEGF no crescimento vascular sanguíneo e linfático. A densidade de microvasos CD31 e D2-40 correlacionou-se significativamente com vários fatores prognósticos, incluindo metástase linfonodal (9). 

    A caspase -3 é uma das biomléculas que operam na apoptose (10). O aparecimento da forma ativa da caspase-3 no citoplasma das células em apoptose é um evento precoce e precede o desenvolvimento de características morfológicas clássicas da apoptose (11). Além disso, foi relatada deficiência de Caspase -3 ou desregulação no câncer de mama e em outro tipo de câncer (12). 

    Muitos antioxidantes estão sendo identificados como anticarcinógenos que caracterizam e otimizam tais sistemas de defesa, que podem ser uma parte importante de uma estratégia de minimizar o câncer e outras doenças relacionadas à idade (4,13). Taurina e seus derivados, como taurolidina e taurocloramina, mostraram efeito antineoplásico in vitro e in vivo; através da supressão da proliferação celular, aumento da apoptose de células tumorais (14-21), e através de efeitos antiogênicos (15,22), enquanto aumenta o índice terapêutico de alguns antitumorais (16). Recentemente o nível de taurina foi utilizado como marcador precoce no carcinoma hepatocelular (HCC) (17) e no câncer de útero (18). 

    O objetivo deste estudo é correlacionar o nível de taurina com os níveis de alguns biomoléculas operando tanto na angiogênese (VEGF, CD31) como na apoptose (TNF-x e Caspas-3) que poderiam ajudar na pronosticação do tumor e avaliar um possível papel da taurina sérica nível como um marcador precoce para câncer de mama em pacientes egípcias. 

    MATERIAIS E MÉTODOS 

    Este estudo prospectivo envolve quatro grupos de um total de oitenta e cinco candidatas. O primeiro grupo é formado por cinquenta pacientes do sexo feminino no National Cancer Institute (NCI), na Universidade do Cairo. As pacientes foram diagnosticadas de acordo com a imagem mamográfica, exames laboratoriais e investigação clínica seguindo o protocolo institucional. Elas estavam passando por uma cirurgia para câncer de mama. Após a obtenção do consentimento verbal informado, uma amostra de sangue pré-operatória foi retirada de cada paciente. As pacientes que receberam nova terapia adjuvante foram excluídas. No segundo grupo foram incluídos dez com lesão mamária benigna. O terceiro grupo é composto por cinco casos, com história familiar positiva. Por fim, vinte mulheres saudáveis ​​foram também recrutadas como controle. Uma amostra de sangue pré-operatório foi retirada de cada paciente para medir o nível sérico de VEGF; Taurina; CA15.3 e TNF-x. O tumor fresco e sua margem de segurança correspondente foram obtidos do primeiro e segundo grupos, para determinação da caspase-3; exame histopatológico e ensaio imuno-histoquímico de VEGF e CD31. Este trabalho foi aprovado pelo comitê de ética do Instituto Nacional do Câncer – Universidade do Cairo (aprovado pelo IRB). 

    Coleta de amostras de sangue: para todos os quatro grupos, após um jejum noturno, foram coletados 7 ml de sangue venoso, em um tubo simples que permitiu a coagulação por meia hora, após o que foi centrifugado a 3.000 rpm por 10 minutos. O soro foi separado e armazenado a – 80ºC para evitar perda de atividade biológica até uma análise de lote para análise de VEGF sérico, taurina TNF-x e CA15.3. 

    • Análise de VEGF no soro: A análise para o VEGF foi realizada utilizando o VEGF ELISA da Oncogen Research Products, (cat # QIA51). 
    • Determinação da taurina sérica: A taurina sérica foi determinada por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) de acordo com a metodologia de extração em pré-coluna e derivatização (19). No trabalho usamos o Shimadzu, Japão, modelo HPIC Lc10AT. 
    • Determinação de TNF-x no soro: Utilizou-se ELISA de TNF-x humano para determinação quantitativa do factor de necrose tumoral alfa, utiliza-se um anticorpo monoclonal específico para TNF-x para cortar o TNF-x e um anticorpo policlonal ligado a enzima específico para TNF- x é usado para quantificação. 
    • Análise CA15.3: Imunoensaios enzimáticos de micropartículas de Abbot Laboratories, Divisão de Diagnósticos (CEA, Dainabot, Tóquio Japão; CA15.3, Abbott Park, IL). Um nível de corte de 30 unidades / ml é usado para CA15.3. 

    Amostras de tecido: Tumor fresco e seus tecidos normais de margem de segurança correspondentes foram obtidos ao mesmo tempo da ressecção cirúrgica de mulheres com câncer de mama submetidas a mastectomia radical e o segundo grupo de dez candidatas com lesão benigna de câncer de mama. 

    • Amostras de tecido foram submetidas à determinação da atividade de Caspase-3, exame histopatológico e ensaio imuno-histoquímico de VEGF e CD31. 
    • Determinação da caspase-3: A caspase-3 é determinada utilizando ensaio de protease colorimétrica Caspase-3 / Cpp32 (ApoTarget). 
    • O anticorpo monoclonal para CD31: CD31 foi determinado imuno-histoquimicamente usando kits comerciais adquiridos da DAKO Corporation, Carpinteria, CA, EUA. 
    • O monoclonal para VEGF foi localizado e determinado em secções de tecido embebidas em parafina de amostras de tumores. Utiliza-se o Factor de Crescimento Endotelial Vascular Anti-Humano de Ratinho Monoclonal, clone VGI (Dakocytomation) de santa Cruse Biotechnology, Inc. O anticorpo marca as isoformas VEGF-121, VEGF-165 e VEGF-189 do factor de crescimento endotelial vascular. O anticorpo marca as características das bandas duplas observadas quando o VEGF é executado sob condições redutoras. 
    • Coloração por imunohistoquímica do VEGF e escore da densidade de microvasos CD31. Todos os tecidos foram fixados em formalina tamponada neutra a 10% e embebidos em aparfina utilizando protocolos de patologia cirúrgica padrão. Os diagnósticos foram estabelecidos a partir de lâminas coradas com H & E usando critérios histopatológicos padrão. A imunohistoquímica foi realizada em um único bloco representativo de cada caso. Utilizando kit SLAB (DAKO Corporation, Carpinteria, CA, EUA) e VEGF (diluição 1: 160), Santa Cruz Biotecnologia, Santa Cruz, CA, EUA). Para a expressão de VEGF, as reações imuno-histoquímicas foram avaliadas em áreas de carcinoma invasivo e em tecido mamário não neoplásico. A intensidade da coloração citoplasmática foi graduada de 0 (sem coloração) a 3 (mais intensamente corada), e a percentagem de células positivas foi notada. 

    ANÁLISES ESTATÍSTICAS 

    Os dados foram analisados no programa Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) versão 10. Os dados foram representados como média SE. Uma análise de variância unidirecional (ANOVA) seguida do teste post hoc de Duncan foi usada para esclarecer a significância estatística entre as médias dos diferentes grupos de pacientes. O teste t não pareado foi usado para comparar as médias de dois grupos. O coeficiente de correlação de Pearson foi calculado para estudar a correlação entre os diferentes parâmetros. Valor de P menor que 0,05 foi considerado significativo. 

    – A sensibilidade, a especificidade, a precisão diagnóstica, o valor preditivo positivo e o valor preditivo negativo, a taxa positiva diferencial (DPR) foram calculadas de acordo com as seguintes fórmulas (20): 

    1. Sensibilidade = a(a + c) 
    1. Especificidade = d/(b + d) 
    1. Precisão diagnóstica = a+ d/(a+b+c+d) 
    1. Valor preditivo positivo = a/a +b 
    1. Valor preditivo negativo = d/c+d 
    1. DPR = sensibilidade + especificidade -1 onde: a = casos positivos verdadeiros, c = casos negativos falsos, d = casos negativos verdadeiros, b = casos positivos falsos. 

    O teste U de Mann-Whitney foi utilizado para comparar as medianas dos dados não paramétricos; (tecido VEGF e CD31). 

    RESULTADOS 

    O nível sérico de taurina foi estimado em diferentes grupos ilustrados na (Tabela 1). Seu nível mostrou diferença altamente significativa entre os grupos controle, os pacientes de alto risco e câncer de mama (F = 380,7, P <0,001). em pacientes com câncer de mama, o nível de taurina foi fortemente menor do que o grupo de alto risco e controle (13,79 ± 0,65 µmol / l); registrando um decréscimo de -0,72 vezes do que o controle (Tabela 2). Nos pacientes com câncer de mama linfonodal positivo, a taurina sérica foi alterada de forma insignificante dos pacientes com linfonodos negativos, registrando níveis séricos de (14,33 ± 0,68 µmol / l) (13,37 ± 1,08 µmol / l), respectivamente, P> 0,05), isto é mostrado na (Tabela 3). Enquanto em grupo de alto risco o nível de taurina foi menor que o grupo controle (30,7 ± 1,38  ± mol / l, registrando um decréscimo de 0,59 vezes do que o controle (Tabela 2). Entre os grupos de alto risco, os de alto risco com benigno lesão mamária registrada (22,3 ± 1,42 µmol / l) que é significativamente menor do que o nível de taurina naqueles com história familiar positiva sem lesão mamária (47,4 ± 2,75 µmol / l) P <0,001, isso é mostrado na Tabela 4 ). 

    A sensibilidade, especificidade, precisão diagnóstica, taxa positiva diferencial (DPR), valores preditivos positivos e negativos de taurina em diferentes valores de corte são calculados enquanto sensibilidade e especificidade de taurina nos valores de corte ótimos (18 µmol / l) foi de 100% (Tabela 5). 

    Os resultados mostraram que não houve diferença significativa no nível de CA 15.3 entre os pacientes com câncer de mama, os grupos de alto risco e controle (F = 0.17, P> 0.05). (Tabela 2) Também não houve diferença estatisticamente significativa no nível de CA 15-3 entre os pacientes de alto risco com história familiar positiva (21,92 ± 1,61) e aqueles com histórico familiar negativo (19,63 ± 0. 72, P> 0,05) (Tabela 4). O valor de corte ótimo de CA 15-3 foi de 21,7 (Tabela 5). Nesse nível, o DPR foi máximo (13,33%), enquanto a sensibilidade, especificidade e precisão diagnóstica foram 40, 73,33 e 47,69%, respectivamente. Os valores preditivos positivo e negativo foram 83,33 e 73,17%, respectivamente. 

    TABELA 1 – CARACTERÍSTICAS DOS GRUPOS INVESTIGADOS 

    Grupos Números Porcentagem Idade (anos) 
    Controle (Normal) 20 100 44.75 ± 1.54 
    Alto Risco 15 100 46.40 ± 1.71 
    História familiar sem lesão na mama 33.33  
    Casos com lesão benigna na mama 10 66.66  
    Pacientes com câncer de mama com estado linfonodal 50 100 47.25 ± 1.08 
    LN + ve 22 44  
    LN   ve 28 56  

    TABELA 2 – NÍVEL SÉRICO DO VEGF-x, TNF-x, TAURINA e CA 15-3 entre diferentes grupos estudados. 

    Grupos Números VEGF (significado ± SE) TNF-x (significado ± SE) Taurina (significado ± SE) CA 15-3 (significado ± SE) 
    Controle 20 8.80 ± 1.12 b 16.55 ± 2.42 ab 53.10 ± 1.49 a 21.05 ± 0.93 
    Grupo Alto Risco 15 17.13 ± 2.08 b (0.94) 14.00 ± 2.54 b (-0.154) 30.7 ± 1.38 b (-0.59) 20.93 ± 0,74 a (-0.006) 
    Pacientes com Câncer 50 146.18 ± 14.85 a (15.61) 26.46 ± 3.29 a (0.59) 13.79 ± 0.65 c (-0.72) 21.11 ± 0.65 b (0.003) 
    F- relação  27.91 3.45 380.7 14.45 
    P – Valor  <0.001 <0.05 <0.001  NS 

    P <0.05: significativo. P <0.001 altamente significativo 

    TABELA 3: NÍVEL SÉRICO DO VEGF (pg/ml), TNF-x (pg/ml), taurina (µmol/l) e níveis de CA 15-5 em LN = ve e LN – ve em pacientes com câncer de mama. 

    Grupos de pacientes Números VEGF (significado ± SE) TNF-x (significado ± SE) Taurina (significado ± SE) CA 15-3 (significado ± SE) 
    LN – Positive 22 199.13 ± 17.54 22.47 ± 4.33 14.33 ± 0.68 22.48 ± 1.05 
    LN – Negative 28 87.75 ± 8.46 20.53 ± 3.72 13.37 ± 1.08 19.97 ± 0.77  
    t-test (P- valor)  <0.001 NS NS NS 

    TABELA 4 : NÍVEL SÉRICO DO VEGF (pg/ml), TNF-x (pg/ml), taurina (µmol/l) e CA 15-3 entre os grupos de alto risco. 

    Grupos Números VEGF (significado ± SE) TNF-x (significado ± SE) Taurina (significado ± SE) CA 15-3 (significado ± SE) 
    H.R. com lesão de mama benigna 14.4 ± 1.63 17.5 ± 6.00 22.3 ± 1.42 21.92 ± 16 
    H.R. com história familiar 10 16.7 ± 2.08 14.4 ± 4.61 47.4 ± 4.61 19.63 ± 0.72 
    t-test (P-valor)  NS NS <0.001 NS 

    TABELA 5: Sensibilidade, especificidade, taxa positiva diferencial, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo de CA 15-3, VEGF, Taurina e TNF-x sob os valores de corte. 

    Marcador sérico Valores de corte Sensibilidade Especificidade Precisão diagnóstica Taxa postiva diferencial (DPR) valor preditivo positivo valor preditivo negativo 
    CA -15 21.7 40 73.33 47.69 83.33 83.33 73.17 
    TNF-x 15 60 66.66 61.53 26.66 85.71 66.66 
    VEGF 25 92 90.76 90.76 78.66 95.83 23.52 
    Taurina 18 100 100 100 100 100 100 

    Resultados para biomoléculas angiogênicas 

    Nossos resultados para o VEGF sérico mostraram uma diferença estudada (F = 27,91, P <0,001). O grupo de pacientes com câncer de mama apresentou o maior nível de VEGF (146,18 ± 14,85 pg / ml) entre todos os grupos; registro 15,61 – aumento do que o controle, enquanto o grupo de alto risco registrou (17,13 ± 2,08 pg / ml); dando apenas um aumento de 0,94 vezes em relação ao controle de mulheres saudáveis, em que o VEGF foi 8,80 ± 1,12 pg / ml (Tabela 2). Não foi detectada diferença estatisticamente significante entre os pacientes de alto risco com história familiar positiva sem lesão mamária (17,5 ± 6,00 pg / ml) e aqueles com lesão mamária benigna (14,4 ± 4,61 pg / ml) , P> 0,05 (Tabela 4). Nos casos linfonodais positivos, o nível de VEGF registrado (199,13 ± 17,54 pg / ml) foi significativamente maior do que os casos com linfonodos negativos (87,75 ± 8,46 pg / ml, P <0,001) (Tabela 3). . O valor de corte ótimo do VEGF foi de 25 pg / ml (Tabela 5). Nesse nível, o DPR foi máximo de 78,66, enquanto a sensibilidade, especificidade e precisão diagnóstica foram de 92,84 e 90,76%, respectivamente. Os valores positivos e preditivos foram 95,83 e 23,52%, respectivamente. 

    Resultados da investigação imuno-histoquímica 

    Angiogênese avaliada por coloração imuno-histoquímica de VEGF intracelular e expressão de CD31 de densidade de microvasculares, em amostra de tecido, os resultados mostraram um aumento altamente significativo na densidade de VEGF em casos de câncer de mama, e este aumento foi maior em casos positivos de grau linfonodo ( Placa 3a-c). Também notou que a expressão de VEGF estava em níveis baixos em tecido normal adjacente e tecidos benignos no grupo de risco. Além disso, a densidade de microvasos expressa pela coloração de CD31 mostrou aumento significativo entre os casos de câncer de mama, como apresentado e mostrado nas Figuras 1, 2 e 3 (Tabela 6).- 

    Resultados das biomoléculas apoptóticas 

    Os resultados do nível de TNF-x mostraram uma diferença significativa entre os pacientes com câncer de mama e o grupo controle (F = 3,45, P <0,05). O grupo de pacientes com câncer de mama apresentou o maior nível de TNF-x (26,46 ± 3,29 pg / ml) em todos os grupos, registrando apenas um aumento de 0,59 vezes. 

    Já o grupo de alto risco e o grupo controle registraram valores comparáveis não significativos entre si (14,00 ± 2,54 pg / ml e 16,55 ± 2,42 pg / ml, respectivamente) (Tabela 2). O valor de corte ótimo do TNF-x foi de 15 pg / ml, neste limiar, o DPR foi máximo (26,66%), enquanto a sensibilidade, especificidade e acurácia diagnóstica foram 60, 66,66 e 61,53%. , respectivamente. Os valores positivos e preditivos foram 85,71 e 66,66, respectivamente (Tabela 5) 

    Atividade da enzima caspase-3: caspase-3, medida em amostras de tecido do tecido maligno ressecado cirurgicamente e tecidos adjacentes normais. A atividade enzimática nos homogeneizados teciduais foi estatisticamente maior nos tecidos adjacentes normais (105,33 ± 0,88 U / l) que os tecidos malignos (64,75 ± 5,62 U / l, P <0,001), talbe 7, esclarecendo essa importante descoberta. 

    O valor do VEGF sérico, taurina e CA15.3 no diagnóstico precoce do câncer de mama em um grupo de pacientes de alto risco é avaliado pela análise da curva ROC (fig. 1a-c), respectivamente. A área mínima de aceitação do marcador diagnóstico = 0,7 (Sox et al. (20)). Para taurina sérica, a área sob a curva (AUC) = 1 indica a validade do uso de taurina em câncer de mama em pacientes com alto risco de câncer de mama, e para VEGF, AUC = 0,95 indicando também a validade do uso de VEGF no diagnóstico. Enquanto para CA1503, AUC = 0,523 indicando a rejeição do uso de CA15-3 no diagnóstico de câncer de mama em pacientes com alto risco. 

    A relação angiogênica / apoptótica foi calculada pela razão VEGF / TNF e estudada estatisticamente entre os diferentes grupos. Houve uma diferença altamente significativa na relação angiogênese / apoptose entre os pacientes com câncer de mama, o alto risco e os grupos controle (F = 11,27, P <0,001). O grupo de pacientes com câncer de mama apresentou a maior proporção (13,55 ± 2,03), entre todos os grupos apresentaram valores comparáveis insignificantes entre si (2,21 ± 0,58 e 1,23 mais 0,36, respectivamente). O grupo com câncer de mama mostrou um aumento de 10.01 vezes do que o controle, enquanto o grupo de alto risco apresentou apenas um aumento de 0,79 vezes (Tabela 8). 

    A relação angiogênica / antiangiogênica foi também calculada como  VEGF / Taurina registando uma diferença altamente significativa na relação angiogênica / antiangiogênica entre os doentes com câncer da mama, nos grupos de alto risco  e os grupos de controle. O grupo de pacientes com câncer de mama apresentou a maior proporção (11,21 ±  1,09), dando F = 33,64, P <0,00; enquanto o grupo de alto risco e o grupo controle apresentaram valores comparáveis insignificantes entre si (0,82 0,08 e 0,16 ± 0,02, respectivamente). O grupo com câncer de mama apresentou um aumento de 69,06 fol do que o controle, enquanto o grupo de alto risco apresentou apenas aumento de 4,12 vezes (Tabela 8). 

    Discussão 

    Bio-marcadores proteícos circulantes são secretados pelas células tumorais ou por suas células ambientais e têm uma especificidade variável. O CA15.3 é o marcador sérico mais utilizado no câncer de mama, sendo atualmente seus principais usos na vigilância de pacientes com doença diagnosticada e no acompanhamento do tratamento de pacientes com doença avançada (21, 23). 

    Os resultados do soro CA15.3 não revelaram nenhuma mudança significativa em relação ao normal em todos os grupos estudados e isso concorda com estudos anteriores que enfatizaram que a aplicação mais importante do CA 15.3 é a previsão do resultado e o monitoramento da terapia em pacientes com câncer de mama avançado (23-25). 

    O fator angiogênico VEGF, mostrou um aumento altamente significativo nos casos de câncer de mama em comparação ao grupo normal, o que apóia a descoberta de estudos anteriores que concluíram que a expressão do VEGF e sua intensidade estão associados a um desfecho significativamente menor de câncer de mama inicial 26. 27). Também VEGF foi encontrado para ser o único fator expresso ao longo de todo o ciclo de vida do tumor de um tumor de mama (6). Nossos resultados mostraram também que em pacientes com câncer de mama linfonodo-positivo; o nível de VEGF foi significativamente maior do que em pacientes com linfonodos negativos. Essa observação concorda com os estudos anteriores que relataram que níveis mais altos de proteína VEGF em tumores de mama mostraram estar associados a um mau prognóstico em pacientes com câncer de mama (28-31). 

    Os resultados da imuno-histoquímica mostraram que a expressão tanto do VEGF quanto do CD31 estava significativamente aumentada no tecido canceroso em comparação ao tecido normal adjacente e tecido benigno no grupo de alto risco. Estes resultados confirmaram a angiogênese aumentada em casos de câncer de mama, e parecem concordar com estudos anteriores que concluíram que no câncer de mama, imuno-histoquímica de VEGF, CD31 e D2-40 densidade de microvasos se correlacionou significativamente com vários fatores prognósticos, incluindo metástase linfonodal (9 ). 

    Os resultados da caspase-3, neste estudo, mostraram que a concentração de enzima nos homogeneizados de tecido foi estatisticamente maior nos tecidos normais adjacentes do que nos tecidos malignos. Esta diminuição no nível de caspase-3 reflete uma regulação negativa e inibição da característica apoptótica no tecido mamário maligno. Este resultado parece concordar com estudos anteriores que enfatizaram que a caspase-3 desempenha um papel importante no processo apoptótico, e a regulação negativa da caspase-3 tem sido relatada em câncer de mama e outros tipos de câncer (32,33). 

    O resultado para TNF-x mostrou apenas um aumento de 0,59 vezes nos casos de câncer de mama em comparação com o controle, esta pequena elevação pode ser contribuída em parte para a angiogênese aumentada apresentada pelo nível elevado de VEGF nos casos de câncer de mama, e isso é apoiado por estudo anterior que relataram que, a angiogênese tumoral é promovida pelo aumento da expressão do TNF-x endógeno e da interleucina-1B (IL-1B) (34). 

    Os humanos desenvolveram um sistema altamente sofisticado e complexo de proteção antioxidante para controlar e neutralizar os radicais livres, entre eles os aminoácidos contendo enxofre, como a metionina, a cisteína e a taurina, que representam um dos mais importantes sistemas antioxidantes do ser humano (35-38). 

    A observação mais impressionante em nosso trabalho são os resultados da taurina antioxidante que mostrou reduções significativas em seus níveis séricos nos grupos de câncer de mama e de alto risco quando comparado ao grupo de controle normal. 

    Essa redução acentuada nos níveis séricos de taurina nos casos de câncer de mama pode contribuir para a diminuição da regulação do processo de apoptose no tecido mamário maligno, apresentado pelos valores mais baixos da atividade da caspase-3. Esta descoberta apoiou as pesquisas anteriores postuladas que a taurolidina inibe o crescimento de linhas de células tumorais humanas in vitro através da indução de apoptose em células tumorais (39-41). 

    Esse nível diminuído de taurina sérica no grupo de câncer de mama pode explicar o aumento da angiogênese tumoral, pois há uma relação recíproca entre taurina e VEGF claramente observada em nossos resultados, confirmada também pela relação angiogênica / antiangiogênica calculada como VEGF / taurina que mostrou 69,06 dobrou o aumento do paciente com câncer do que o controle. 

    A descoberta mais interessante em nossos resultados é o nível de taurina no grupo de alto risco que registrou também um nível diminuído significativo do que o grupo normal (30,7 µmol/l)  / l vs. 53 µmol/l)). Enquanto isso, entre os grupos de alto risco, o grupo de pacientes com lesão benigna da mama mostrou um nível significativamente menor de taurina do que o grupo com história familiar positiva e sem lesão mamária (22 µmol/l)  vs. 47,4 µmol/l)). É claro que, mesmo nos casos em que a história familiar é positiva, sem qualquer sinal de tumor benigno ou maligno, o nível de taurina não excedeu o limite inferior registrado no grupo controle de saúde (46 µmol/l)). 

    É interessante, destacar a gama de níveis séricos de taurina entre o grupo de pacientes de alto risco com lesão benigna da mama, como os valores máximo e mínimo foi de 31 e 18 µmol/l, respectivamente, e no grupo tendo apenas história familiar positiva 57 e 40 µmol/l, respectivamente, enquanto no grupo controle essa faixa foi de 70 e 46 µmol/l. Assim, poderíamos especular a transformação do tumor quando o nível de taurina exibisse um valor menor que 30 µmol/l. Pode-se notar também que havia uma margem de segurança para o nível de taurina sérica em 40  µmol/l, que é o valor mais baixo registrado apenas na história familiar de alto risco. 

    O uso da área sob a curva Receiver Operating Characteristic (ROC) foi útil na elucidação da validade de um marcador específico na detecção precoce do câncer de mama. A área calculada para cada taurina e VEGF em nossos resultados provou a validade de usá-los como um marcador precoce em relação ao câncer de mama. Enquanto o CA15.3 revelou a rejeição deste marcador para o diagnóstico precoce, e este achado concorda com achados anteriores, pois vários estudos enfatizaram que a CA15.3 carece de sensibilidade para a doença precoce, e também carece de especificidade para o câncer de mama (8). A descoberta  impressionante é a sensibilidade da taurina que registrou 100% de sensibilidade, em seu valor ótimo de corte (18 µmol/l ), já que não temos resultados falso-positivos ou falso-negativos para os níveis séricos de taurina entre os casos de câncer de mama. 

    Com base nessas descobertas, podemos sugerir que a medição da taurina é mais eficiente na predição de mulheres altamente suscetíveis ao câncer de mama, pois seu nível foi claramente diminuído antes mesmo da transformação maligna e em mulheres de alto risco com lesão benigna da mama. 

    O VEGF, foi sugerido para desempenhar um papel no desenvolvimento do câncer, e muitos estudos revelaram que a expressão do VEGF poderia ser impulsionada pelo estresse oxidativo (42, 43). Podemos sugerir que o nível diminuído de taurina sérica pode resultar em estresse oxidativo que envolveu o início da transformação maligna do tecido mamário. Além disso, esse estresse oxidativo resulta em uma produção excessiva do fator angiogênico VEGF, e isso confirmado por vários estudos enfatizando que o estresse oxidativo pode causar angiogênese no carcinoma de mama através de incrementos de produção celular do fator angiogênico VEGF e IL-8 e também por promover a secreção de metaloproteinase de matriz 1 (MMP-1) e por outros mecanismos. Outros estudos também descobriram que a regulação do VEGF pode ser alcançada pela melhora do estresse oxidativo através da administração de antioxidantes (44-46). Além disso, outros estudos enfatizaram que o uso da taurina como potente captador de radicais livres poderia melhorar a lesão oxidativa induzida pelo metotrexato (MTX) e modular a resposta imunológica e aliviar os efeitos colaterais sistêmicos da quimioterapia, bem como a nefrotoxicidade do tamoxifeno no tratamento do câncer de mama ( 47,48). 

    Finalmente, podemos sugerir que a taurina, por seu papel como antioxidante, antiangiogênico e apoptótico, não apenas age como anticarcinógeno, mas também pode ser usada como quimio-preventiva em caso de terapia contra o câncer, especialmente no câncer de mama (4,38,44,48). Recentemente, muitas pesquisas através da luz sobre o uso de taurilidina como droga antineoplásica em carcinoma da bexiga humana (49) câncer gastro-intestinal (50) para prevenir o desenvolvimento de metástase pulmonar (51), e pode oferecer opção terapêutica adicional no paciente com adenocarcinoma do cólon (51), como um modulador útil para aumentar o índice terapêutico de alguns agentes antitumorais (16), no tratamento do câncer de esôfago (14), no tratamento de mesotelioma maligno (52) e como um biomarcador em células não musculares câncer de bexiga invasivo (53). Em conclusão e com base no presente estudo, podemos sugerir fortemente a avaliação do nível de taurina em soros de pacientes com alto risco de câncer de mama e no diagnóstico precoce de quaisquer alterações malignas na mama. 

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